Biotinski peptidi

Kaj so biotinilirani peptidi?

Biotinilirani peptidi so peptidi, ki so bili modificirani tako, da vključujejo del biotina. Ta modifikacija izkorišča visoko{1}}afinitetno interakcijo med biotinom in avidinom ali streptavidinom, ki se pogosto uporablja v bioloških in biokemičnih aplikacijah. Molekula biotina je majhna, stabilna in bistveno ne spremeni strukture ali delovanja peptida, hkrati pa omogoča zelo učinkovito zajemanje ali odkrivanje s sistemi, ki temeljijo na avidinu-.

 

Kemična modifikacija
Biotin se običajno uvaja z reagentom NHS-biotin (N-hidroksisukcinimid biotin), ki reagira s primarnimi aminskimi skupinami, ki se nahajajo na N-koncu peptida ali lizinskih ostankih, in tvori stabilno amidno vez.

生物素（Biotin） 肽（Peptid）

COOH NH₂

| |

+---EDC/NHS---→ 活化羧基（Aktivacija） → 缩合（Povezava）

↓ ↓

Biotin-CONH-peptid

 

afinitetna interakcija
Biotinilirani peptid se lahko močno veže (Kd ~10⁻¹5 M) na avidin ali streptavidin, zaradi česar je idealen za uporabo v testih, ki zahtevajo natančno detekcijo, zajemanje ali imobilizacijo.

Primeri sinteze biotiniliranih peptidov

Peptidno zaporedje: biotin-Ahx-YXXXXXRXRRR-NH2

Dolžina: 11A

Purity: >95%

M.W: 1898.32

Peptidno zaporedje: biotin-YXXXXXRXRRR--ERXXXDLXXXXPVXXXXPRR

Dolžina: 31A

Purity: >95%

M.W: 4145.89

 

Uporaba biotiniliranih peptidov

Biotinilirani peptidi so vsestransko orodje v raziskavah in industriji s široko paleto aplikacij, vključno z:

Čiščenje afinitete

Uporablja se za čiščenje vezavnih partnerjev, kot so proteini, protitelesa ali nukleinske kisline, z imobilizacijo biotiniliranega peptida na streptavidinskih kroglicah.

ELISA in Western blotting

Biotinilirani peptidi delujejo kot sonde za odkrivanje specifičnih interakcij, ko so združeni z avidin-HRP ali avidin-fluorescentnimi oznakami.

Površinska plazmonska resonanca (SPR)

Uporablja se za imobilizacijo peptidov na biosenzorskih čipih za študije interakcij.

Odkritje zdravil

Preverjanje kandidatov za zdravila z analizo njihove vezave na tarče biotiniliranih peptidov.

Imunologija

Biotinilirani peptidi se uporabljajo za kartiranje epitopov, preučevanje interakcij antigen-protiteles in izvajanje testov T-celic.

Preslikava epitopov za razvoj cepiva

Biotiniliran peptid po meri je bil uporabljen za identifikacijo antigenskih epitopov virusnega proteina, kar je pomagalo pri oblikovanju kandidata za cepivo.

Beljakovine-Študije medsebojnega delovanja beljakovin

Biotinilirani peptidi, imobilizirani na ploščah, prevlečenih s-streptavidinom, so omogočili preučevanje interakcij med-ligandom receptorjev in razkrile afinitete vezave, ki so ključne za razvoj zdravil.

Optimizacija imunskega testa

V diagnostičnem testu so bili kot antigeni uporabljeni biotinilirani peptidi za izboljšanje občutljivosti in specifičnosti testa ELISA za odkrivanje biomarkerjev bolezni.

 

Reference

1. Green, NM (1975).Avidin in streptavidin.Biochemical Journal, 131 (3), 781-791.

2. Chaiet, L. in Wolf, FJ (1964).Lastnosti streptavidina, proteina,-ki veže biotin, ki ga proizvaja Streptomyces.Arhiv za biokemijo in biofiziko, 106(1), 1-5.

3. Finn, FM, in Titus, G. (1994).Biotinilacija proteinov v raziskavah in biotehnologiji.Analna biokemija, 218 (1), 1-7.